ELISA液體樣本處理方法及收集注意事項
一、通用基礎處理流程
所有ELISA液體樣本都需用無菌管收集,在2~8℃條件下以2000~3000轉/分離心20分鐘左右,去除沉淀和懸浮物,收集上層澄清上清液即可用于后續檢測,若存放過程中出現沉淀,使用前需再次離心處理。
二、不同類型液體樣本的專屬處理方法
血清樣本?
用無抗凝劑的無菌試管采集新鮮血液,室溫靜置10~30分鐘讓血液自然凝固,再按通用流程離心取上清,避免劇烈搖晃引發溶血。
血漿樣本?
根據檢測需求提前選擇EDTA、肝素鈉或檸檬酸鈉作為抗凝劑,采血后立即輕柔顛倒混勻10~20分鐘,再按通用流程離心取上清,注意不要觸碰中間層的白細胞和血小板。
尿液、唾液、腦脊液、細胞培養上清等樣本?
直接用無菌管收集樣本,按通用流程完成離心取上清即可,細胞培養上清需額外注意提前去除殘留的細胞碎片。
三、收集與保存注意事項
嚴禁使用含有?NaN??的樣本,它會抑制體系中HRP酶的活性,直接導致檢測出現假陰性結果。
樣本采集后建議盡快完成檢測,若無法當天檢測,需按單次使用量分裝后置于-20℃或-80℃環境凍存,嚴格避免反復凍融,防止目標蛋白降解失活。
全程避免樣本發生溶血,紅細胞破裂釋放的過氧化物酶類物質會引發非特異性顯色,造成假陽性,同時也要防止細菌污染,避免引入內源性干擾物。
部分特殊樣本(如牛奶、蜂蜜)需提前參考對應文獻做預前處理,再按通用流程完成離心操作。
步驟流程:
標準品和樣本的添加
加入檢測抗體
封板和孵育
洗滌
加入底物B
避光孵育
加入終止液
數據檢測
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