什么是ELISA，ELISA目的及實驗方法有哪些?

    什么是ELISA，ELISA目的及實驗方法有哪些?

    ELISA即酶聯免疫吸附測定，指將可溶性的抗原或抗體結合到聚苯乙x等固相載體上，利用抗原抗體結合專一性進行免疫反應的定性和定量檢測方法。

    ELISA應用的范圍很廣，而且正在不斷地擴大，原則上ELISA可用于檢測一切抗原、抗體及半抗原，可以直接定量測定體液中的可溶性抗原。

    擴展資料：

    ELISA操作步驟復雜，影響反應因素較多，特別是固相載體的包被難達到各個體之間的一致，因此在定量測定中，每批測試均須用一系列不同濃度的參考標準品在相同的條件下制作標準曲線。

    測定大分子量物質的夾心法ELISA，標準曲線的范圍一般較寬，曲線高點的吸光度可接近2.0，繪制時常用半對數值，以檢測物的濃度為橫坐標，以吸光度為縱坐標，將各濃度的值逐點連接，所得曲線一般呈S形，其頭、尾部曲線趨于平坦，較呈直線的部分是理想的檢測區域。

    ELISA也可應用于病毒抗體檢測：流感病毒、腮腺炎病毒、麻診、風疹、輪狀病毒、皰疹病毒、巨細胞病毒、EB病毒、腺病毒、腸道病毒、腦炎病毒、黃熱病毒、狂犬病毒和脊髓灰質炎病毒等，其敏感性都超過目前常用的檢測方法。此外，還可用于鑒定病毒型別，例如皰疹病毒。

    ELISA目的是檢測血清中特定的抗原，以達到定性判斷的目的。

    酶聯免疫吸附測定(簡寫ELISA)指將可溶性的抗原或抗體結合到聚苯乙x等固相載體上，利用抗原抗體結合專一性進行免疫反應的定性和定量檢測方法。

    ELISA分類方法：

    1、夾心法

    夾心法常用于檢測大分子抗原。

    2、間接法

    間接法常用于檢測抗體。

    3、競爭法

    競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機制，一般用于檢測小分子抗原。

    ELISA實驗所有方法的缺點很明顯：

    1、重復性不好;

    2、收自身抗體、嗜異性抗體等干擾，易出現假陽性;

    3、不論儀器和手工操作，干擾因素較多。影響的是溫度和時間。

    1、直接法(directELISA)

    將抗原直接固定在固相載體上，參加酶符號的一級抗體，即可測定抗原總量，此一級抗體的特異性非常重要。

    優勢：操作手續簡略，因無須運用二抗可防止交互反響。

    缺陷：實驗中的一抗都得用酶符號，但不是每種抗體都適合做符號，費用相對進步。

    2.間接法(indirectELISA)

    此測定辦法與直接法相似，不一樣在于一級抗體沒有酶符號，改用酶符號的二級抗體去辨識一級抗體來測定抗原量。

    優勢：二抗能夠加強信號，并且有多種挑選能做不一樣的測定剖析。不加酶符號的一級抗體則能保存它最多的免疫反響性。

    缺陷：交互反響發作的機率較高。

    3.雙抗體夾心法(sandwichELISA)

    被檢測的抗原包被在兩個抗體之間，其間一個抗體將抗原固定于固相載體上，即捕捉抗體。另一個則是檢測抗體，此抗體可用酶符號后直接測定抗原的量;或不符號，再透過酶符號的二級抗體來測定抗原的量。這兩種抗體有必要當心選擇，才可防止交互反響或競爭一樣的抗原聯系部位。

    優勢：高活絡、高專一性，抗原無須事前純化。

    缺陷：抗原必定得具有兩個以上的抗體聯系部位。

    4.競爭法(competitiveELISA)

    樣本里的抗原(自在抗原)和純化并固定在固相載體上的抗原(固定抗原)一同競爭一樣的抗體，當樣品里的自在抗原越多，就能夠聯系越多的抗體，而固定抗原就只能聯系到較少的抗體，反之亦然。經清潔過程，洗去自在抗原和抗體的復合物，只留下固定抗原和抗體的復合物，拿來與只要固定抗原的對照組成果相比擬，依據呈色區別就可計算出樣品里的抗原含量。

    優勢：可適用比擬不純的樣本，并且數據再現性很高。

    缺陷：全體的敏感性和專一性都較差。

    注：以上僅供參考，不作為實際數據，實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。

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